在ELISA實(shí)驗前的注意事項

1       仔細閱讀說(shuō)明書(shū)

2       確定試劑盒在有效期內

3       按說(shuō)明書(shū)確定所有試劑齊全（數量、體積）

4       標本制備要規范，每份標本體積要按2-3個(gè)復孔以上的量制備（貯存），盡量分裝做備份。短期內無(wú)法實(shí)驗者，注意低溫保存

5       準備好所有實(shí)驗額外所需物品，如試管、吸頭、移液器、離心機等

6       根據檢測標本數量確定所需試劑的量

7       按說(shuō)明書(shū)將所用試劑平衡至室溫，配制所需試劑

DIY夾心法ELISA常見(jiàn)技術(shù)指南

8       選擇抗體時(shí)選擇一個(gè)單抗和一個(gè)多抗進(jìn)行配對；若選擇兩個(gè)單抗，必須識別不同表位的抗體；從同一家公司選擇抗體對。

9       ELISA實(shí)驗中為了確定*佳信號和背景應將捕獲抗體（0.5-4μg/ml）和檢測抗體（0.25-2μg/ml）在預實(shí)驗中進(jìn)行彼此相抗的滴定。同時(shí)，應包括在適當范圍內的標準品的系列稀釋。按試劑說(shuō)明書(shū)常規提供的范圍進(jìn)行操作。

10     標準品的配制：對于每種細胞因子應仔細閱讀說(shuō)明書(shū)，注意每批的細節。在使用細胞因子前，瞬時(shí)離心試劑瓶，盡可能多地收回其中的細胞因子。根據每批說(shuō)明書(shū)中的細節，將凍干的細胞因子復溶。

11     一般待測抗原標準曲線(xiàn)的線(xiàn)性范圍的可通過(guò)將標準品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml 到15pg/ml�？衫�用標準的ELISA操作流程、放大試劑盒、第三類(lèi)試劑、或改變酶底物系統可在一定范圍內提高靈敏度。

12     為了優(yōu)化靈敏度，建議過(guò)夜孵育標準品和標本。

13     若使用過(guò)氧化物酶作為顯色系統，應嚴禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉，疊氮鈉可抑制過(guò)氧化物酶的活性。

14     當測定混合液體中的抗原時(shí)，如血清，建議在標本稀釋液中加不相干的Ig.

     每個(gè)試劑盒操作是不同的，請按說(shuō)明書(shū)操作。具體事項請來(lái)電咨詢(xún)

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更新時(shí)間：2024/8/8 15:23:47