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    ELISA酶聯(lián)免疫試劑盒特異性好，靈敏度高。

    它的方法類(lèi)型和操作步驟如下：ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。在這種測定方法中有3種必要的試劑：①固相的抗原或抗體，②酶標記的抗原或抗體，③酶作用的底物。根據試劑的來(lái)源和標本的性狀以及檢測的具備條件，可設計出各種不同類(lèi)型的檢測方法。

    （一）雙抗體夾心法

     雙抗體夾心法：是檢測抗原常用的方法，操作步驟如下：

    （1）將特異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體：洗滌除去未結合的抗體及雜質(zhì)。

    （2）加受檢標本：使之與固相抗體接觸反應一段時(shí)間，讓標本中的抗原與固相載體上的抗體結合，形成固相抗原復合物。洗滌除去其他未結合的物質(zhì)。

    （3）加酶標抗體：使固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。洗滌未結合的酶標抗體。此時(shí)固相載體上帶有的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量正相關(guān)。

    （4）加底物：夾心式復合物中的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。根據顏色反應的程度進(jìn)行該抗原的定性或定量。

    根據同樣原理，將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標抗原結合物，即可用雙抗原夾心法測定標本中的抗體。

    （二）雙位點(diǎn)一步法

    在雙抗體夾心法測定抗原時(shí)，如應用針對抗原分子上兩個(gè)不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標抗體，則在測定時(shí)可使標本的加入和酶標抗體的加入兩步并作一步。這種雙位點(diǎn)一步不但簡(jiǎn)化了操作，縮短了反應時(shí)間，如應用高親和力的單克隆抗體，測定的敏感性和特異性也顯著(zhù)提高。單克隆抗體的應用使測定抗原的ELISA提高到新水平。

    在一步法測定中，應注意鉤狀效應（hookeffect），類(lèi)同于沉淀反應中抗原過(guò)剩的后帶現象。當標本中待測抗原濃度相當高時(shí)，過(guò)量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結合，而不再形成夾心復合物，所得結果將低于實(shí)際含量。鉤狀效應嚴重時(shí)甚至可出現假陰性結果。

   （三）間接法測抗體

    間接法是檢測抗體常用的方法，其原理為利用酶標記的抗抗體以檢測已與固相結合的受檢抗體，故稱(chēng)為間接法。操作步驟如下：

    （1）將特異性抗原與固相載體連接，形成固相抗原：洗滌除去未結合的抗原及雜質(zhì)。

    （2）加稀釋的受檢血清：其中的特異抗體與抗原結合，形成固相抗原抗體復合物。經(jīng)洗滌后，固相載體上只留下特異性抗體。其他免疫球蛋白及血清中的雜質(zhì)由于不能與固相抗原結合，在洗滌過(guò)程中被洗去。

    （3）加酶標抗抗體：與固相復合物中的抗體結合，從而使該抗體間接地標記上酶。洗滌后，固相載體上的酶量就代表特異性抗體的量。例如欲測人對某種疾病的抗體，可用酶標羊抗人IgG抗體。

     每個(gè)試劑盒操作是不同的，請按說(shuō)明書(shū)操作。具體事項請來(lái)電咨詢(xún)！

（注：本試劑只用于科研，歡迎來(lái)電咨詢(xún)!）
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更新時(shí)間：2024/11/22 9:19:51