ELISA技術(shù)的-操作要點(diǎn)

    的試劑,良好的儀器和正確的操作是ELISA檢測結果的必要條件。ELISA的操作因固相載體的形成不同而有所差異,國內醫學(xué)檢驗一般均用板式點(diǎn).本文將敘述板式注意要點(diǎn),要詳細的使用說(shuō)明,嚴格遵照規定操作,必能得出的結果.

    1 標本的采取和保存

可用作 ELISA測定的標本十分廣泛,體液（如血清）,分泌物（唾液）和排泄物（如尿液,糞便）等。均可作標本以測定其中某種抗體或抗原 成份.有些標本可直接進(jìn)行測定（如血清,尿液）,有些則需經(jīng)預處理（如糞便和某些分泌物）.大部分ELISA檢測均以血清為標本 .血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外,其他成份均同等于血清.制備血漿標本需借助于抗凝劑,而血清標本只要待血清自然凝固,血塊收縮后即可取得.除特殊情況外,在醫學(xué)檢驗中均以血清作為檢測標本.在ELISA中血漿和血清可同等應用.血清標本可按常規方法采集,應注意避免溶血,紅細胞溶解時(shí)會(huì )釋放出具有過(guò)氧化物酶活性的物質(zhì),以HRP為標記的ELISA測定中,溶血標本可能會(huì )增加非特異性顯色.血清標本宜在新鮮時(shí)檢測.如有細菌污染,菌體中可能含有內源性HRP,也會(huì )產(chǎn)生假陽(yáng)性反應.如在冰箱中保存過(guò)久,其中的可發(fā)生聚合,在間接法ELISA中可使本底加深.一般說(shuō)來(lái),在5天內測定的血清標本可放置于4℃,超過(guò)一周測定的需低溫冰存.凍結血清融解后,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應充分混勻宜輕緩,避免氣泡,可上下顛倒混和,不要在混勻器上強烈振蕩.混濁或有沉淀的血清標本應先離心或過(guò)濾,澄清后再檢測.反復凍融會(huì )使抗體效價(jià)跌落,所以測抗體的血清標本如需保存作多次檢測,宜少量分裝冰存.保存血清自采集時(shí)就應注意無(wú)菌操作,也可加入適當防腐劑.

    2 試劑的準備

按試劑盒說(shuō)明書(shū)的要求準備實(shí)驗中需用的試劑. ELISA中用的蒸餾水或去離子水,包括用于洗滌的,應為新鮮的和高質(zhì)量的.自配的緩沖液應用pH計測量較正.從冰箱中取出的試 驗用試劑應待溫度與室溫平衡后使用.試劑盒中本次試驗不需用的部分應及時(shí)放回冰箱保存.

    3 加樣

在 ELISA中一般有3次加樣步聚,即加標本,加酶結合物,加底物.加樣時(shí)應將所加物加在LEISA板孔的底部,避免加在孔壁上部 ,并注意不可濺出,不可產(chǎn)生氣泡.

備注：只限參考，具體操作需按說(shuō)明書(shū)。請來(lái)電咨詢(xún)。

（注：本試劑只用于科研，歡迎來(lái)電咨詢(xún)!）
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更新時(shí)間：2024/8/2 14:41:24